Екстракція білків 1

Сучасні методи подрібнення тканин зазвичай поєднують з одночасною екстракцією білків з гомогенатов тканин. Більшість білків тканин добре розчиняється в 8-10% розчинах солей. При екстракції білків широко застосовують різні буферні суміші з певними значеннями рН середовища, органічні розчинники, а також неіонні детергенти - речовини, що руйнують гідрофобні взаємодії між білками і ліпідами і між білковими молекулами.

З органічних сполук, крім давно застосовуються водних розчинів гліцерину, широко використовують (особливо для солюбілізації) слабкі розчини сахарози. На розчинність білків при екстракції великий вплив робить рН середовища, тому в білкової хімії застосовують фосфатні, цитратні, боратного буферні суміші зі значеннями рН від кислих до слаболужних, які сприяють як розчинення, так і стабілізації білків. Особливо широкого поширення набули трис-буферні системи, що представляють собою суміші 0,2 М розчину трис- (оксиметил) -амінометана (HOCH2) 3 CNH2 (скорочено позначають «трис») з 0,1 М розчином соляної кислоти в різних співвідношеннях. Для виділення білків сироватки крові використовують способи їх осадження етанолом (див. Метод Кона), ацетоном, бутанолом і їх комбінації. Майже всі органічні розчинники розривають білок-ліпідні зв'язку, сприяючи кращої екстракції білків.

Для отримання з біологічного матеріалу білків в чистому, гомогенному, стані застосовують різні детергенти, що сприяють розщепленню білок-ліпідних комплексів і розриву білок-білкових зв'язків. Зокрема, для звільнення білків (ферментів), міцно пов'язаних з біомембранами мітохондрій або інших субклітинних структур, застосовують тритон Х-100, додецилсульфат натрію і дезоксихолат натрію.

Екстракція білків 1

Мал. 1.1. Лабораторне обладнання.

а - маточний ручної гомогенізатор: 1 - товкач, 2 - корпус, 3 - мотор, 4 - штатив; механічний гомогенізатор (б) і кульова млин (в): 1 - корпус з електродвигуном і пусковим пристроєм, 2 - камера для подрібнення матеріалу.

Слід, однак, мати на увазі, що детергенти, викликаючи розрив білок-білкових зв'язків, руйнують олігомерних (четвертинних) структуру білків.

Схожі статті