У зв'язку з тим що бифидобактерин є анаеробними, при їх вирощуванні в більшість поживних середовищ вносять редуцирующие речовини, які підтримують низький окислювально-відновний потенціал в середовищі. Як, редукуючих речовин використовують аскорбінову кислоту, сульфіт кальцію, солянокислий цистеїн, частини внутрішніх органів тварин, глюкозу, глюгатіон, сульфіт натрію, тиогликолат натрію. Наявність цих речовин в поживних середовищах дозволяє проводити культивування біфідобактерій в 'пробірках, що містять високий стовпчик напіврідкої живильного середовища.
Біфідобактерін чутливі до рН-середовища. Різні дослідники рекомендують використовувати для культивування біфідобактерій пітательниесреди з рН в межах 6,2-7,5. При рН нижче 5,0 ріст біфідобактерій призупиняється. Важкою задачею є виділення біфідобактерій із зразків, всіяні сторонніми анаеробними мікроорганізмами, а також рядом інших мікроорганізмів. Складність полягає в тому, що ця група мікроорганізмів вимагає наявності в живильному середовищі великого набору поживних речовин і чутлива до різних інгібіторів. При виділенні біфідобактерій із зразків, всіяні сторонньої мікрофлорою, в поживні середовища вносять індикатори (анілііблау, хінаблау), в результаті чого колонії біфідобактерій фарбуються в різні кольори.
Для селективного виділення біфідобактерій з faeces розроблені BS-arap I і II (Мітсуока) і селективний агар Хенеля, а для виділення з молочних продуктів використовуються агар NPNL і модифікований агар Рогози. У ці середовища в якості селективних речовин додані канаміцин, неоміцин, хлористий літій, азид натрію, сорбінова кислота, які пригнічують головним чином зростання бактерій групи кишкової палички. Розроблено селективні середовища для культивування певних штамів біфідобактерій.
Метод часових стекол. Готують ряд десятикратних розведень досліджуваного продукту або faeces. Використовують дві живильні середовища: щільне середовище для вирощування В. prodigiosum і середу Хенеля для вирощування біфідобактерій.
У чашки Петрі заливають розплавлену і охолоджену до температури 40-45 ° С середовище Хенеля. Після застигання агару чашки Петрі поміщають в термостат при 37 ° С для підсушування агару. На підсушену поверхню агару наносять краплі досліджуваних розведень, а зверху закривають годинниковим склом з культурою В. prodigiosum. Потім ці чашки завадять в гсрмостат при температурі 37 ° С на 48 год. Утворилися колонії біфідобактерій мають синій колір. Підраховують кількість колоній, що виросли на різних розведеннях: в I г нли I мл (34). Крім цього, колонії можуть бути пересіяно в напіврідку живильне середовище для вирощування та проведення подальших фізіологічних досліджень та ідентифікації біфідобактерій.
Посів в пробірки з високим стовпчиком живильного середовища. Готують ряд десятикратних розведень відповідно до передбачуваного обсеменением досліджуваних продуктів. При приготуванні розведень необхідно уникати попадання повітря в пробірки під час перемішування і перенесення в наступні пробірки.
Як поживних середовищ можуть бути -використовувати середу Blaurock, гідролізатную-молочна, кукурудзяно-лактозная і інші середовища (див. 142).
Пробірки з високим стовпчиком живильного середовища кип'ятять на водяній бані протягом 10-15 хв, потім швидко охолоджують і засівають в них відповідні розведення. Пробірки після застигання агару розміщую в термостат при 37 ° С і витримують протягом 48-72 год. Після закінчення інкубації реєструють розведення, в яких відзначено зростання біфідобактерій, підраховують кількість -біфідобактерій (у вигляді гречаних зерен, тяжів або цвяхів) в розведенні і визначають кількість клітин бактерій в 1 мл. Інтенсифікація зростання біфідобактерій спостерігається в напрямку дна пробірки. При масивному зростанні мікроорганйзмоз, як правило, відзначається наявність стерильної зони у верхній частині живильного середовища, висота стерильної зони для різних штамів різна.
При змішаній мікрофлорі кисломолочних поодуктов можна використовувати живильні середовища, що містять нежторие антибіотики, які пригнічують ріст молочнокислих бактерій, але до яких стійкі біфідобактерії.