При мікроскопічному дослідженні тканин і органів велике значення має техніка взяття матеріалу. Наведені правил взяття матеріалу дозволить зменшити кількість артефактів і помилок під час гістологічного дослідження.
1. Шматочки органів слід вирізати гострим ножем або бритвою. Користуватися ножицями, щоб уникнути Розім'яті тканин не рекомендується. Не можна здавлювати шматочки, шкребти або протирати їх поверхню, особливо слизову і серозну оболонки.
2. Шматочки вирізують товщиною 0,5-1 см, довжина і ширина може бути різною (зазвичай 1 х 1,5 см) з таким розрахунком, щоб одержуваний зріз помістився під стандартне покривне скло. З огляду на повільного проникнення фіксатора в глибину тканини взяття на дослідження більш товстих шматочків не рекомендується.
3. Шматочки відразу ж поміщають в фіксуючу рідину. Неприпустимо обмивання шматочків водою перед фіксацією.
Фіксація забезпечує стабілізацію тканинних структур і їх ущільнення. Вибір фіксує середовища залежить від завдань дослідження (наприклад, при необхідності виявлення глікогену об'єкти слід фіксувати у формаліні, а в етанолі). Обсяг фіксує рідини повинен перевищувати обсяг шматочків не менше, ніж в 10 разів. При цьому стежать, щоб шматочки в розчині не злипалися і не прилягали до дна банки. Охолодження фіксуються в формаліні об'єктів небажано, тому що при цьому сповільнюється проникнення фіксатора в тканини.
Формалін найбільш поширена і універсальна фіксує рідина. Формалін добре проникає в тканини і тому може застосовуватися для фіксації досить великих об'єктів. Після фіксації у формаліні об'єкти можуть бути залиті в парафін, целлоидин або порізані на заморожувати мікротому. Великою перевагою формаліну як фіксатора є можливість збереження в ньому шматочків протягом тривалого часу після завершення фіксації. Недоліком формаліну є погіршення забарвлення тканин при тривалій фіксації і зберіганні вологого архіву.
Для фіксації тканин застосовують як 96% -й, так і абсолютний етиловий спирт, а також різні суміші етанолу і формаліну. У практичній роботі слід застосовувати етанол при фіксації нервової тканини для забарвлення по Нісль і при плануванні виявлення глікогену. Кращі результати дає спиртова фіксація в порівнянні з формалінової і при виявленні заліза, бактерій, амілоїду. У порівнянні з формаліном спирт має меншу проникаючу здатність, тому шматочки для фіксації беруть не товще 0,5 см. Тривалість фіксації від декількох годин до доби.
Складні фіксують рідини:
У практичній роботі зазвичай складні фіксуючі рідини не використовуються, однак в дослідницькій роботі їм часто віддають перевагу перед формаліном і етанолом в зв'язку з більш високою якістю фіксації окремих клітинних і тканинних структур, меншим числом артефактів фіксації і кращим збереженням тинкторіальних властивостей тканин.
Цей фіксатор зазвичай застосовують для імуногістохімічних досліджень, оскільки він добре зберігає білки, асоційовані з клітинними мембранами. Фіксатор готують, розчиняючи в 2 л дистильованої води 50 г хлориду цинку і додаючи 300 мл концентрованого розчину формальдегіду і 1.9 мл крижаної оцтової кислоти. Тривалість фіксації не більше 24 годин при кімнатній температурі.
Рідина Буена добре фіксує всі тканини, крім тканин нирки, не призводить до значного стиснення і деформації пухких тканин і тому часто використовується в експериментальних і ембріологічних дослідженнях. Фіксатор готується ex tempore з насиченого (1,2%) водного розчину пікринової кислоти, концентрованого формальдегіду (40%) і крижаної оцтової кислоти в співвідношенні 15: 5: 1. Тривалість фіксації близько 24 год при кімнатній температурі.
Ця фіксує рідина добре зберігає структуру ядра клітини і часто застосовується при необхідності швидкої фіксації і прискореної проводки. Фіксатор готується не більше, ніж за 1 годину до початку фіксації. Складається фіксатор з абсолютного спирту, хлороформу і крижаної оцтової кислоти в співвідношеннях: 6: 3: 1. При фіксації в рідини Карнуа шматочки слід вирізати товщиною не більше 4 мм. Тривалість фіксації становить 3 - 4 години.
Декальцинація кісткової тканини
Декальцинацію проводять після повної фіксації тканини, при цьому необхідна подальша ретельна промивка матеріалу (1-3 ч) в слаболужних розчинах. Декальцінуючі рідина складається з 100 мл 90% мурашиної кислоти, 80 мл 38,8% соляної кислоти (питома вага 1,19) і 820 мл дистильованої або водопровідної води. Обсяг декальцінуючі рідини повинен значно перевищувати обсяг декальцініруемого об'єкта (в 10-20 разів). Невеликі шматочки компактної кістки (12 г) декальцінуючі при температурі 24 ºС за 12 - 24 год.