Мета: ознайомитися з методикою приготування нервово-м'язового препарату жаби для проведення фізіологічних досліджень.
Об'єкт дослідження: жаба.
Устаткування і матеріали: набір препаровальной інструментів, ножиці великі хірургічні, ножиці малі (очні), пінцети малі (анатомічний і хірургічний), препаровальной голка, шпильки, проб-ковая пластина, розчин Рінгера для холоднокровних тварин, лігатура, тарілка, тазик почкообразний , серветки, вата.
Порядок виконання. Знерухомити жабу шляхом руйнування головного і спинного мозку (центральної нервової системи). Цю процедуру можна виконати двома способами (етапи препарування контролюйте по Рис. 1.1 і 1.2).
1. Декапітація (на малюнку не зображена) і руйнування спинного мозку. Взяти жабу за спинку великим і вказівним пальцями. Тримати черевцем вниз. Обернути її серветкою так, щоб передні лапки були притиснутими до тулуба, задні - випрямлені, а голова залишилася відкритою. Тримати жабу в лівій руці (для праворуких!) Тім'ям догори, ввести в ротову порожнину збоку тупу браншу великих ножиць, а потім швидко, одним рухом відсікти верхню щелепу на 0,7-1 см дистальніше очниць. Препаровальной голку ввести в спинномозковий канал і двома - трьома поступально-обертальними рухами зруйнувати спинний мозок. Для попередження значної крововтрати на місце розрізу накласти ватний тампон і злегка притиснути його пінцетом.
2. Загорнути жабу в серветку, як зазначено вище, взяти її в ліву руку так, щоб великий палець розташовувався на спинці, а вказівний на голові. Вказівним пальцем натиснути на голову. Між головою і тулубом утворюється кут (Рис. 1.1 а). Препаровальной голкою з невеликим натиском провести по середній лінії голови від очниць зверху вниз, поки голка НЕ зісковзне в невелику ямку, відповідну атланто - окціпітальной мембрані (Рис. 1.1 б).
Мал. 1.1. Знерухомлення жаби:
а - пошук ямки, що відповідає атланто-окціпітальной мембрані; б - руйнування головного мозку; в - руйнування спинного мозку
Встановити голку перпендикулярно атланто - окціпітальной мембрані і в цьому місці проколоти голкою шкіру. Ввести препаровальной голку в порожнину черепа і декількома рухами вліво - вправо зруйнувати головний мозок. Чи не витягуючи голки з рани, повернути її до перпендикулярного положення. Повернувши голку, ввести її в спинномозковий канал (Рис. 1.1в), зворотно-поступальними рухами препаровальной голки зруйнувати спинний моз, про що будемо свідчити зникнення тонусу м'язів задніх кінцівок.
Знерухомлену жабу взяти за задні лапки так, щоб черевце відвисла, і перерізати хребет на 1-1,5 см проксимальніше копчиковой кістки (Рис. 1.2.1). Зробити два розрізи м'яких тканин вздовж хребта справа та зліва, підрізаючи шкіру і м'язи до симфізу і видалити відвисають внутрішні органи. На цьому етапі препарування залишаються задні кінцівки з хрестцем і фрагментом хребта. Фрагмент хребта захопити серветкою або ватяним тампоном однією рукою, іншою рукою, теж через серветку, захопити шкірний клапоть на спині і одним швидким рухом зняти шкіру з кінцівок (Рис. 1.2.2). Препарат двох задніх лапок жаби покласти на тарілку і рясно змочити розчином Рінгера.
Необхідно вимити руки і великі ножиці. Вміщені в слизу речовини надають шкідливу дію на нервову тканину!
Препарат двох задніх лапок взяти в ліву руку за залишився фрагмент хребта дорсальній стороною догори, тазові кістки при цьому повинні прийняти майже вертикальне положення, а куприкова кістка видаватися вгору. Великими ножицями відсікти копчиковую кістка до хребта (Рис. 1.2.3). Розглянути на вентральній стороні лежать з двох боків уздовж тазових кісток нервові стовбури і, намагаючись не порушити їх цілісність, розрізати уздовж фрагмент хребта і лонное зчленування (Рис. 1.2.4). Розріз проводити акуратно, так як при необережному поділі можна перерізати один з сідничних нервов.На одному з двох отриманих препаратів послідовно отпрепарировать сідничний нерв від хребта до колінного суглоба. Для цього препарат помістити на коркову пластину вентральної поверхнею догори, і, притримуючи за фрагмент хребта, відокремити нерв від навколишніх тканин. Для цього зімкнуті бранши пінцета акуратно ввести між нервом і тазової кісткою. Розводячи бранши пінцета, відокремити нерв від навколишніх тканин (від хребта до стегна). Великими ножицями розсікти тазову кістку якомога ближче до фрагменту хребта.
Мал. 1.2. Приготування нервово-м'язового препарату:
1 - перерізання хребта; 2 - зняття шкіри з задніх кінцівок; 3 - видалення копчиковой кістки; 4 - препарат задніх лапок жаби, пунктиром позначена лінія розрізу хребта і лонного зчленування; 5 - задня лапка після розрізу лонного зчленування; 6 - виділення сідничного нерва; 7 - біологічний реоскоп ( «реоскопіческая лапка»); 8, 9 - препаровка литкового м'яза; 10 - перерізання вище і нижче колінного суглоба; 11 - нервово-м'язовий препарат жаби: а - литковий м'яз; б - колінний суглоб; в - сідничний нерв; г - фрагмент хребта
Повернути препарат дорсальній поверхнею догори, шпилькою зафіксувати препарат на корковій пластині в області лонного зчленування. Розвести пінцетом м'яза стегна в сторони, оголити сідничний нерв. Взяти пінцетом залишився фрагмент хребта, підняти його і маленькими ножицями обережно відсікти навколишні тканини від нерва (Рис. 1.2.5 і 1.2.6). При цьому не слід торкатися нерва металевими інструментами. Особливо це важко зробити при виділенні його в області тазостегнового суглоба. Якщо нерв відпрепарованих з порівняно великою кількістю навколишніх тканин, то пізніше їх легко видалити пінцетом.
Не слід натягувати нерв, так як це може порушити його фізіологічну цілісність (що зовні не помітно). Фрагмент хребта тримати так, щоб нерв трохи провисав. Цей прийом дозволяє зберегти фізіологічну цілісність нерва. Під час препарування необхідно періодично змочувати тканини розчином Рінгера, щоб уникнути їх підсихання.
Потім, стегнову кістку з м'язами відрізати над колінним суглобом. Отриманий препарат з XVIII в. прийнято називати біологічним реоскопом іліреоскопіческой лапкою (Рис. 1.2.7). Лабораторні роботи даного заняття будуть виконуватися на такому препараті. Для інших робіт, виконуваних на наступних заняттях, необхідно навчитися виготовляти і класичний нервово-м'язовий препарат. Для цього зімкнуті бранши пінцета підвести під литкового м'яза (Рис. 1.2.8,). Розводячи бранши пінцета, відокремити м'яз. Під ахіллове сухожилля підвести лігатуру і міцно його перев'язати. Перерізати ахіллове сухожилля нижче (дистальніше) перев'язки. За лігатуру відвести литкового м'яза в сторону (Мал. 1.2.9). Відсікти гомілкову кістку і залишилися м'язи під колінним суглобом (Рис. 1.2.10). Вільні кінці лігатури зв'язати в петлю діаметром 2-3 см (Рис. 1.2.11).
Результати. Вказати анатомічні частини нервово-м'язового препарату (див. Рис. 1.2.11).
Висновки. Охарактеризувати значення приготованих препаратів для вивчення збудливих тканин.