Для проведення преимплантационной діагностики (PID) необхідно отримати клітинний матеріал ембріона. Цей матеріал потрібен для різнобічних біологічних і молекулярно-генетичних досліджень, що дозволяють встановити або виключити передачу спадкових захворювань, генетичних і хромосомних дефектів.
Сам ембріон до моменту PID перебуває ще в лабораторних умовах. Він отриманий методом екстракорпорального запліднення (ЕКЗ) і проходить стадію первинного розвитку в спеціальному інкубаторі.
Власне, сама ця стадія теж включає в себе кілька стадій:
- стадія первинного розподілу
- стадія формування бластоцисти
При первинному розподілі ембріон збільшується до 6-10 клітин. Бластоциста складається вже з декількох десятків або сотень клітин. Виявляється і початкова клітинна спеціалізація - клітини бластоцисти діляться на дві популяції: зовнішню (трофобласт) і внутрішню (ембріобласт).
На кожній з цих стадій можливе проведення клітинної біопсії (взяття окремих клітин для мікроскопічних досліджень).
Дивно, але клітинну біопсію можна проводити і на більш ранній стадії, до формування ембріона - і навіть до завершення штучного запліднення. Це методика префертілізаціонной діагностики (Präfertilisationsdiagnostik). Біопсія проводиться після проникнення сперматозоїда в яйцеклітину, але до завершення їх злиття, при якому об'єднуються ядра чоловічої і жіночої статевих клітин. В ході біопсії у запліднених яйцеклітин забирають так звані полярні тільця (Polkörper), що передують стадію первинного розподілу. Полярні тільця містять набір батьківських хромосом. Набір ще не парний, а одинарний (гаплоїдний) - але і в такому наборі хромосоми піддаються діагностичного вивчення.
Словом, конкретні види біопсії поділяються залежно від стадії проведення:
- На стадії запліднення - біопсія полярних тілець (Polkörperbiopsie, або PKB). Беруться одно-два тільця від запліднюють яйцеклітини.
- На стадії початкового ембріонального ділення - біопсія бластомерів (Blastomerenbiopsie). Беруться один-два бластомери (первинні клітини ембріона).
- На стадії формування бластоцисти - біопсія її клітин (Blastozystenbiopsie). Береться невелика кількість поверхневих клітин (трофобласта).
До недавнього часу біопсія бластомерів була центральною процедурою преимплантационной діагностики. Зараз все частіше проводяться, в залежності від конкретних цілей, або біопсія полярних тілець, або біопсія бластоцисти.
біопсія бластомеров
Вона проводиться на етапі, коли ембріон складається в середньому з восьми клітин-бластомерів.
Клітини ембріона оточені «блискучою оболонкою» (Zona pellucida). Необхідно проникнути крізь неї, щоб дістатися до бластомерів. Колишня методика була така: намічений для проникнення крихітну ділянку «блискучої оболонки» роз'їдали складним фізіологічним розчином (так званий кислий розчин Рінгера - Тироде). В даний час поверхневу оболонку пунктируют лазером: процедура точна і безпечна. В місце проколу вводять біоптіческій капіляр, їм відбирають відповідний для дослідження бластомер (або, для надійності, пару). Відповідними визнаються бластомери з добре помітними ядрами. Це важливо для подальшого вилучення і вивчення ланцюжків ДНК.
Якщо знайдений один бластомер, що відповідає всім вимогам, то другий вже не шукають. Біопсія двох бластомерів підвищує ризик неприємних побічних наслідків, які можуть позначитися при імплантації ембріона в матку і при подальшому, фетальном розвитку плода.
Взагалі, через ризик побічних дії біопсія бластомеров проводиться нині лише в рідкісних випадках.
Біопсія полярних тілець
Полярні тільця виникають в яйцеклітині на етапі підготовки первинного мейотичного поділу. Для подальшого розвитку яйцеклітини і ембріона ці тільця не потрібні. Але оскільки вони містять хромосомний набір майбутнього організму, то дають хороший матеріал для генетичної діагностики ембріона, з яким ще тільки належить сформуватися.
Полярні тільця формуються в яйцеклітині по черзі, спочатку найперше, потім друге. Біопсію проводять через шість годин після утворення другого бичка. Відповідно до цього розраховують і час запліднення яйцеклітини, щоб біопсію тілець можна було провести приблизно через дві години після впровадження сперматозоїда (до закінчення цього часу яйцеклітина занадто чутлива, зовнішнє роздратування може їй зашкодити).
Як і при біопсії бластомерів, необхідно проникнути під «блискучу оболонку», яка в даному випадку виступає поверхневої захистом яйцеклітини. Але кислий розчин Рінгера - Тироде застосовувати не можна. У яйцеклітин знижений кислотно-лужний баланс, надходження кислої фракції порушить її розвиток. Перш проводили механічне «пробуравліваніе», зараз його все частіше замінює лазерна пункція.
Тельця збираються біоптіческім капилляром, введеним через лазерний «прокол». Якщо тільця фрагментовані, то необхідно зібрати всі фрагменти, оскільки в них «розсіяний» хромосомний набір.
біопсія бластоцисти
Вона проводиться на п'ятий день після запліднення і дозволяє досліджувати широкий набір хромосомних доданків, які дісталися ембріону від батьків, і його власне генетичне пристрій.
Для досліджень відбираються клітини трофектодерми (поверхневого шару бластоцисти). З цього шару після імплантації ембріона в матку формується плацента. Внутрішні клітини не витягуються. Таким чином біопсія не є «проникненням в тіло ембріона».
Додаткову інформацію щодо організації лікування в Німеччині
або задайте ваше запитання через