Попалася тут мені інфа по ріжку. Вирішив для неї створити окрему тему, олдові комрад підтримали. Тема для мене актуальна, можливо кого то це теж цікавить. Інформація не моя, з якихось пристроїв інету, не пам'ятаю звідки.
Вирощування культури ріжків.
Кукурудзяний сироп (тверді речовини Staley) - 5 м Сахароза - 10 м
KH2PO4 - 0.5г.
MgSO4 * 7H2O - 0.3г. Агар - 20 м
Дистилят. вода до 1000мл. 2.NL563 (попередня):
Кукурудзяний екстракт (тверді речовини Staley) - 20 г. кукурудзяний сироп (тверді речовини Staley) - 10 г. Сахароза - 20 м
KH2PO4 - 1 м
MgSO4 * 7H2O - 0.3г. Дистилят. вода до 1000мл. 3.NL500 (ферментаційна): Сукцинат амонію - 30 м Маннит - 30 м
KH2PO4 - 1 м
MgSO4 * 7H2O - 0.3г.
1,2 пропандіол - 30 мл.
Дистилят. вода до 1000мл. (Довести PH до 5.1 10% -ної соляної кислотою).
(Грегер Д. Ерге Д. Освіта похідних лізергінової кислоти в глибинній культурі claviceps paspali Stevens et Hall. Мікробіологія, 1966, Т.35, Вип.4, С.606-611.)
Вирощування і витяг алкалоїдів ріжків
Вирощування і витяг алкалоїдів ріжків
Робимо культуральне середовище, змішуючи такі компоненти з 500мл
дистильованої води в 2л узкогорлой колбі:
Ca (NO3) 2 - 1g
KH2PO4 - 0,25g MgSO4 - 0,25g KCl - 0,125g
Fe2 (SO4) 3 * 6H2O - 8,34mg ZnSO4 - 3,44mg
сахароза - 100g
борошно курячих ембріонів - 50g
Потім довести обсяг середовища до 1л встановлюючи pH4 за допомогою розчину NH4OH і лимонної кислоти. Приготована Середовище стерилізують в автоклаві. Далі засівають середу попередньо обробленої (як в методі Грегера і Ерге) культурою Claviceps purpurea. Потім затикається цю справу пробкою з стерильного бавовни і інкубується 2 тижні. Періодично перевіряють pH і підтримують його в районі pH4.
Через 2 тижні культура буде візуально наблюдатся;) Це маткова середу. Беремо кілька однакових ємкостей (колб) обсягом на 1 галон з гумовою пробкою. У пробці робимо 2 отвори, в які вставляємо 2 скляні трубки - коротку і довгу. У верхню частину довгої вставляють пробку-фільтр з стерильного бавовни і гумовою трубкою приєднують до компресора (для акваріумів). Коротку трубку приєднують (через гумову) до довгій трубці колби Ерленмейра, яка також з двома скляними трубками різної довжини і в якій знаходиться гіпохлорид натрію.
Таким чином середа з культурою C.purpurea успішно аерується (тому що вони аероби) і підтримується чистота культури.
Але це все потім. Спочатку ферментер розбираємо і, упакувавши в крафт-пакети, стерилізуємо в автоклаві. 1-Галонен колби заповнюються середовищем тогоже складу на 2/3 - 3/4 об'єму і теж автоклавіруются. Делее в стерильних умовах заражаємо 1-Галонен колби маткової середовищем, збираємо ферментер і включаємо компресор. Повинні наблюдатся бульбашки повітря, що проходять через культуральне середовище. Ми залишаємо процес на 10 днів при t = 25 "C в досить темному місці.
Через 10 днів робимо культуральне середовище 1% спиртової, додавши відповідну кількість 95% етанолу. Ми залишаємо ще на 2 тижні. Після 24 днів вирощування припиняють. додають до середовища 2% винну к-ту, перемішують і залишають на годину. Потім защелачівают розчин до pH9 за допомогою NH4OH і екстрагують алкалоїди бензолом або сумішшю хлороформу і ізобутанолу. Після знову Екстрактується 2% спиртовим розчином винної к-ти і сушать під вакуумом. Отримуємо тартрат алкалоїдів найбільш підходящу для зберігання форму. Перед подальшим синтезом їх необхідно перевести в вільну форму.
Від себе хочеться додати, що стерилізації вхідного повітря краще використовувати бактерицидну лампу, поміщену в трубу. По-моєму так
надійніше.
Угорський спосіб отримання алкалоїдів
1. Подрібнену ріжки обезжиривают петролейним ефіром.
2. Змішують з суспензією окису магнію (MgO магнезія палена) в воді і алкалоїди екстрагують бензолом.
3. З бензольного екстракту алкалоїди витягають 2% винною кислотою.
4. З винного вилучення алкалоїди у вигляді тартратов висолюють NaCl
5. Осад змішують з окисом магнію і алкалоїди витягували хлороформом.
6. Хлороформний екстракт сушать безводним Na2SO4 і хлороформ упаривают в вакуумі в струмі CO2 при t не вище 60 "C.
Залишок вливають в 5-кратне кількість петролейного ефіру, що випали
в осад алкалоїди, у вигляді пластівчасті осаду, фільтрують і сушать.